穩轉株構建過程有關細胞瞬時轉染的說明

 　　穩轉株構建是利用哺乳動物系統生產蛋白，主要方式有瞬時轉染和穩轉株篩選兩種。通過穩定細胞系構建篩選穩定表達細胞株。針對瞬時轉染，外源基因在短時間轉錄翻譯得到的蛋白量較少，1mg質粒得到1mg蛋白，能夠滿足小量蛋白制備，大量生產成本很高。穩定轉染的是將外源基因整合到細胞自身的基因組上，隨著細胞的生長分裂外源基因可以穩定表達，同時經過抗生素加壓篩選，最終得到能夠穩定表達蛋白的穩定細胞系。
　　瞬時轉染以Lipofectamine轉染試劑為例的操作流程，不同轉染試劑請參考說明書：
　　1.將復蘇后常規培養的細胞按照1-3x10^5接種到6孔板中，加入2-4ml的*培養基，混勻放置在二氧化碳培養箱中37℃過夜；
　　2.無菌狀態下配置如下溶液
　?、儆?00ul的無血清培養基稀釋2ug的待轉染的質粒；
　?、谟?00ul的無血清培養基稀釋25ul的Lipofectamine轉染試劑（血清的存在會影響轉染效率，因此要使用無血清培養基轉染）。
　　3.將ab溶液混合并搖勻，室溫下放置30min左右；
　　4.細胞培養至80%單層左右，用無血清培養基洗滌細胞2次，每孔加入1ml的無血清培養基，并將混合后的ab溶液逐滴加入到每孔，按十字方向輕搖混勻，二氧化碳培養箱中37℃培養24小時；
　　5.將轉染液倒出，換為*培養基繼續培養。